王永胜 王艳青 马立保 唐文花
摘 要 采用2×3随机试验设计，钙水平分别为0.5％和1.0％，酪蛋白磷酸肽（CPPs）水平分别为0、0.1％和0.5％。选用144只1日龄AA肉仔鸡，公母各半，随机分为6组，每组4个重复，每个重复6只鸡，试验期为4周。试验结果表明：添加0.1％、0.5％酪蛋白磷酸肽（CPPs）对胸腺、脾脏和法氏囊重量及免疫器官指数、血清IgG和IgM的影响不显著（P>0.05）；添加0.1％和0.5％ CPPs均极显著提高肉仔鸡新城疫抗体效价（P<0.01），0.1％与0.5％ CPPs之间差异不显著（P>0.05）；0.5％ CPPs显著提高肉仔鸡血清IgA（P<0.05）和极显著提高外周T-淋巴细胞转化率（P<0.01）。
关键词 肉仔鸡；酪蛋白磷酸肽；免疫功能
中图分类号 S831
1 材料与方法
1.1 试验设计及动物分组
采用2×3随机试验设计，钙水平分别为0.5％和1.0％，酪蛋白磷酸肽（CPPs）分别为0、0.1％和0.5％。将144只健康的1日龄AA肉仔鸡按公母各半原则随机分为6组，每组设4个重复，每个重复6只鸡，饲喂4周。试验设计见表1。各组间鸡的初始体重差异不显著（P＞0.05）。试验在华中农业大学动物科技学院动物营养代谢室进行。
1.2 日粮组成及营养水平
参考NRC（1994）家禽营养需要配制钙水平不同的玉米－豆粕型日粮，Ca：P=1.5：1。酪蛋白磷酸肽由广州轻化所提供。基础日粮组成及营养水平见表2和表3。
表2 低钙水平日粮组成及营养水平
1.3 饲养管理
试验鸡采用地面厚垫料平养，自由饮水、采食，饲养管理按照肉仔鸡饲养管理手册要求进行，按正常免疫程序免疫。
1.4 样品的采集
① 试验结束后,颈静脉采血,测定血清免疫球蛋白。
② 肉仔鸡放血拔毛后，取出胸腺、法氏囊、脾脏，剥离附着的脂肪后称重。
1.5 测定指标与方法
1.5.1 血清免疫球蛋白IgA、IgG和IgM的测定
试剂盒购于上海复兴长征医学科学有限公司，具体操作参考试剂盒说明书。
1.5.2 免疫器官重量及免疫器官指数
将剔除脂肪的左侧胸腺、脾脏和法氏囊迅速称重，免疫器官指数＝（免疫器官鲜重/体重）×100％。
1.5.3 外周T-淋巴细胞转化实验
参考程宝鸾（2000）、司徒镇强和吴军正（1996）、张卓然（1999）所描述的方法。肉鸡翅静脉无菌采抗凝血2 ml，等量Hanks液稀释，加于2 ml淋巴细胞分离液上层，2 000 r/min离心10 min，吸取淋巴细胞层，移入无菌离心管，适量Hanks液洗涤2次，2 000 r/min离心10 min，弃上清液，DMEM完全培养基（含10％小牛血清）悬浮沉淀，6 mg/ml台盼蓝拒染，活细胞计数，调整细胞浓度为2×107个/ml。
96孔细胞培养板每孔加50 μl细胞悬液，对照组加50 μl DMEM完全培养基，试验组加50 μl的ConA，每组设3个重复。置37 ℃培养箱，5％ CO2 培养箱中培养约72 h。培养结束前3 h，加入5 mg/ml MTT 20 μl。培养结束后，去上清液，加入150 μl DMSO溶液，用酶标仪在490 nm检测各孔OD值。淋巴细胞转化率
1.5.4 新城疫血凝抑制抗体效价
参考陈其新和吴真军（1995）、李学俭（2002）和梁轩（2001）所描述的方法。
28日龄采用红细胞凝集与凝集抑制实验测定血清中新城疫血凝抑制抗体效价，所用新城疫（Lasota株）和1％鸡红细胞由动物医学院微生物实验室提供。
1.6 数据统计分析
试验所得数据采用SPSS（13.0）软件中的独立样本 t检验进行分析。各组数据格式均表示为平均数±标准差(M±SD)。
2 结果与分析
2.1 免疫器官重量及免疫器官指数（见表4）
方差分析结果表明：不同钙和CPPs水平之间肉仔鸡胸腺、脾脏和法氏囊重量及免疫器官指数差异不显著(P>0.05)，钙与CPPs之间无交互作用(P>0.05)。
2.2 肉仔鸡血清免疫球蛋白含量（见表5）
方差分析结果表明：不同钙水平之间血清IgA水平差异不显著（P>0.05）；不同CPPs水平之间血清IgA水平，0.5％ CPPs组显著高于对照组(P<0.05)，与0.1％ CPPs组差异不显著(P>0.05)，0.1％ CPPs组与对照组差异不显著（P>0.05）；钙与CPPs之间无交互作用（P>0.05）。不同钙和CPPs水平之间血清IgG与IgM差异不显著(P>0.05)，钙与CPPs之间无交互作用(P>0.05)。
2.3 肉仔鸡外周T-淋巴细胞转化率（见表6）
方差分析表明：不同钙水平之间外周T-淋巴细胞转化率差异不显著（P>0.05）；不同CPPs水平之间外周T-淋巴细胞转化率差异显著(P<0.05)，0.5％ CPPs组外周T-淋巴细胞转化率明显高于对照组，0.1％CPPs组与对照组和0.5％ CPPs组差异不显著（P>0.05）；钙与CPPs之间无交互作用（P>0.05）。
2.4 肉仔鸡新城疫抗体效价（见表7）
方差分析表明：不同钙水平之间新城疫抗体效价差异不显著（P>0.05）；不同CPPs水平之间差异极显著(P<0.01)，0.1％ CPPs组与0.5％ CPPs组新城疫抗体效价高于对照组(P<0.01)，0.1％ CPPs组与0.5％ CPPs组差异不显著（P>0.05）；钙与CPPs之间无交互作用(P>0.05)。
3 讨论
免疫球蛋白是介导体液免疫的主要抗体，血清抗体的高低在一定程度上反映机体对疾病的抵抗能力。参与粘膜免疫反应的主要活性物质是免疫球蛋白，即分泌型IgA和一些能下调全身性免疫应答的效应性T细胞，以及粘膜定向细胞运输系统。IgA作为抗感染的最初屏障，起着十分重要的作用，因此，病毒特异性IgA抗体水平是评价机体免疫水平的一个重要标志。
本试验在低钙（0.5％）和正常钙（1.0％）日粮中，分别添加0.1％与0.5％ CPPs，对肉仔鸡胸腺、脾脏、法氏囊重量及免疫器官指数，血清IgG和IgM的影响不显著(P>0.05)；0.5％ CPPs显著提高血清IgA含量(P<0.05)，说明在肉仔鸡日粮中添加CPPs能提高机体的粘膜免疫力。3周龄小猪日粮中添加0.5％ CPPs 5 周，体重、血清和粪中IgG 和IgM水平也没有明显的变化，但IgA水平明显提高。说明口服CPP-I可能有益于提高仔猪的粘膜IgA 反应（Otani H，2000）。但Zhang F M（2003）给小鼠饲喂添加0.1％ CPPs的饲料，血清和小肠IgA、IgG、IgM水平都没有明显的变化。
在小鼠日粮中添加CPPs，其血清和小肠IgG、IgM和IgE对脂多糖（LPS）的免疫反应影响不大，但小鼠粪和小肠抗脂多糖（LPS） IgA 以及总IgA 水平明显提高，脾脏细胞产生大量的IgA、IL-5和IL-6(Otani,2003)。13周以后，小鼠小肠总IgA 和卵清蛋白特异性IgA 明显提高，但血清卵清蛋白特异性IgE 水平明显低于对照组。脾脏IL-6产量明显提高，但IL-4 产量明显低于对照组。说明口服CPP-III可能有利于降低IgE抗体介导的免疫症状 (Otani，2004)。本试验表明CPPs能显著提高肉仔鸡新城疫抗体效价（P<0.01），与Otani（2000、2003、2004）在猪和小鼠上的研究结果相同，说明CPPs可以提高动物体的免疫能力。Kitamura和Otani（2002）在母猪分娩前2个月至仔猪断奶当天饲粮中添加0.5％ CPPs，1个月后，发现母猪粪便中IgA的含量明显高于对照组，在分娩之前1月和1周，其血清IgG的含量都在升高。分娩当天母猪乳汁中IgA和IgG含量分别比对照组提高1.5％和1.7％，出生10 d后,仔猪血清IgG含量稍高于对照组。而在本试验中，添加CPPs对血清IgG没有影响，可能是因为动物种类的差别。
T-淋巴细胞转化率是在体外反映细胞受到外界刺激下转化为淋巴细胞增殖程度的一个重要指标，可以反映机体的细胞免疫能力，即T-淋巴细胞转化率越高，意味着淋巴细胞在外来因子刺激下的增殖反应上升。本试验在低钙（0.5％）和正常钙（1.0％）日粮中分别添加0.1％与0.5％ CPPs，0.5％ CPPs能显著提高肉仔鸡外周T-淋巴细胞转化率（P<0.05）。
4 小结
添加0.1％和0.5％ CPPs能显著提高肉仔鸡新城疫抗体效价，同时，0.5％ CPPs还能显著提高肉仔鸡血清IgA含量和外周T-淋巴细胞转化率。
（参考文献15篇，刊略，需者可函索）
（编辑：刘敏跃，）
王永胜，黄冈师范学院，438000，湖北省黄冈市。
王艳青（通讯作者）、马立保、唐文花，华中农业大学动物科技学院。
收稿日期：2007-03-26 |
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