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李晓卉 张雁平
青海湖裸鲤（Gymnocypris przewalskii），又名湟鱼，属鲤科（Gyprinidae），裂腹鱼亚科（Schizothoracinae），裸鲤属（Gymnocypris），是高原特化的裂腹鱼中的裸鲤属分布在青海湖的唯一鱼种，也是青海湖地区重要的经济鱼类，属国家二类保护珍贵鱼类。由于青海湖特殊的高原地理环境，湖中盛产的裸鲤生长十分缓慢，每10年体重增加0.5kg，并因具有耐盐、耐高寒等优良特性而被生物学家所关注。但近几十年来，由于青海湖注水河流干枯、降水量锐减、蒸发量增加、湖面水位下降、湖水含盐量增加等使水域生态环境极度恶化，裸鲤产量急剧下降，加之滥捕屡禁不止，使该鱼种数量越来越少，资源面临枯竭。为保护青海湖裸鲤种质资源，恢复和提高资源量，保存和扩大这一名贵生物，本文首次对青海湖裸鲤肠道消化酶活性进行了定量分析，以期为该鱼种进一步的研究提供依据。
1 材料与方法
1.1 样品采集
健康青海湖裸鲤60尾，按体重分成大、中、小3组，每组20尾；购市售健康活鲤鱼6尾，体重约0.5kg左右。
1.2 样品处理
现场活体剖腹，采取肠道，用4℃蒸馏水冲净肠道内容物，以滤纸吸去水分后称重，再经充分研碎，加生理盐水以1：10稀释，制成匀浆液，匀浆液于4℃静置1h后，以3 000r/min离心30min，取上清液，置冰箱中保存备用。
1.3 试剂仪器
蛋白酶检测试剂盒（购自华美生物工程公司），1.5ml Eppendorf管，微量移液器，恒温水浴箱，721分光光度计。
1.4 蛋白酶活性测定方法
1.4.1 在1.5ml Eppendorf管中加入FTC-酪蛋白溶液50μl，培养缓冲液50μl，样品液100μl，同时设空白样，其中样品液100μl 换成去离子水，然后放于37℃水浴箱中孵育4h。
1.4.2 加5%的三氯乙酸溶液500μl，终止反应。
1.4.3 混合均匀，放入37℃水浴箱中孵育10min或4℃30min。
1.4.4 以12 000r/min离心5min。
1.4.5 移取400μl上清液至另一个管中，再加600μl分析缓冲液，混合均匀。
1.4.6 以空白反应管为对照，读取492nm吸光度。蛋白酶活性定义：每分钟产生1μg酪氨酸为1个蛋白酶活性单位。
1.5 淀粉酶活性测定方法
1.5.1 采用碘-淀粉比色法，在三角瓶中加入1ml 40℃预温5min的底物缓冲液（pH7.0，酶底物淀粉浓度为0.4g/l），加0.2ml酶液，混匀，40℃水浴加热7.5min，再加入碘稀释液1ml，去离子水6ml。测定管同时设3个平行样，空白管不加酶液，加去离子水6.2ml，混匀，于660nm波长处以去离子水调吸光度为零，读各管吸光度。
1.5.2 淀粉酶活力计算
淀粉酶活力=（AB-AU）/AU×800
式中：AB——空白管吸光度；
AU——测试管吸光度。
淀粉酶活性定义：100ml酶液中的酶，在40℃和底物淀粉作用30min，水解10mg淀粉为1个淀粉酶活性单位。
1.6 数据分析
试验数据采用统计软件进行分析。
2 结果
2.1 青海湖裸鲤肠道蛋白酶活性在依体重大小划分的各组间差异不显著（P＞0.05）；青海湖裸鲤肠道蛋白酶活性与鲤鱼肠道蛋白酶活性差异不显著（P＞0.05），见表1。
2.2 青海湖裸鲤肠道淀粉酶活性在各组间差异不显著（P＞0.05）；青海湖裸鲤肠道淀粉酶活性与鲤鱼肠道淀粉酶活性差异不显著（P＞0.05），见表1。
3 讨论
鱼类的消化器官组织结构和消化机能是与其食性相适应的，消化器官组织结构不同，其消化机能不同，所以消化酶的活性也有明显差异。肉食性鱼类的消化道短，蛋白酶活性强，草食性鱼类的消化道长，糖酶活性强。蛋白酶活性与食性有关，肉食性鱼类最强，其次为杂食性鱼类，草食性鱼类最低。本试验中发现，青海湖裸鲤消化道长，肠道长度是鲤鱼的1倍；裸鲤属杂食性鱼类，但湖内动物性食料少，其肠道淀粉酶活性高，而蛋白酶活性低，说明裸鲤为偏草食性的鱼类。
李晓卉，青海省畜牧兽医科学院，副研究员，810003，青海省西宁市宁张路43#。
张雁平，单位及通讯地址同第一作者。
收稿日期：2005-03-21
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