刘 军 陈爱敬 胡先勤 汪 明 黄 峰 荣克明
摘 要 通过在日粮中添加不同水平多糖复合物(mixture of chitosan and saccharicterpenin, MCS)，研究其对鲫鱼（Carassius auratus）躯体生化组成、脏器指数及白细胞数目的影响。研究结果表明：3个MCS添加组水分含量、粗蛋白含量较空白对照组有所降低（P＞0.05），但粗脂肪含量则有不同程度增加(P＞0.05);3个MCS添加组灰分含量均低于空白对照组,且0.25%MCS组显著低于空白对照组(P＜0.05)；各组间钙、磷含量无显著差异（P＞0.05）。添加不同水平的MCS对鲫鱼脏体比、肝胰脏指数和胆指数均具有不同程度的降低作用，其中0.50%MCS组脏体比极显著（P＜0.01）、肝胰脏指数显著（P<0.05）低于空白对照组；3个MCS添加组胆指数均极显著低于空白对照组（P＜0.01），1.00%MCS组胆指数也显著低于0.25%MCS组（P<0.05），且随MCS添加量的增加胆指数呈现下降趋势；各组间头肾指数、脾脏指数差异不显著（P＞0.05）。各组间血液白细胞数目差异不显著（P＞0.05）。
关键词 多糖复合物；鲫鱼；躯体生化组成；脏器指数；白细胞数目
中图分类号 S963.73
糖萜素（saccharicterpenin）是从山茶科植物中提取的混合物，是由糖类、三萜化合物和有机酸组成的天然生物活性物质；壳聚糖(chitosan)是甲壳素（chitin）脱乙酰基后的降解产物。研究表明，壳聚糖、糖萜素等多糖类物质具有提高免疫力、增强肠道消化酶活性、促生长和改善产品品质等作用，已在水产养殖中得到广泛应用。但有关其对水产动物脏器指标影响的文献较少，且对之复合物的作用尚未见研究报道。本试验以鲫鱼（Carassius auratus）为研究对象，通过在日粮中添加由壳聚糖、糖萜素按一定比例组成的多糖复合物（mixture of chitosan and saccharicterpenin，MCS），测定分析鲫鱼躯体生化组成、脏器指数和白细胞数目，以期探讨其应用于水产养殖的可行性和作用。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验鲫鱼购自中国科学院水生生物研究所关桥基地。多糖复合物由武汉天辰生物科技有限公司提供,其主要成分为壳聚糖、糖萜素组成的复合物(MCS)；饲料原料均从武汉九如饲料厂购买，矿物质由武汉工业学院饲料厂提供。
1.2 试验设计
1.2.1 试验分组
试验鱼在实验室驯养10 d后，挑选无病、无伤、体质健康鲫鱼进行养殖试验。试验分为1个空白对照组和3个多糖复合物添加组，多糖复合物添加水平分别为0.00%、0.25%、0.50%与1.00%。每组设4个重复，每个重复放养40尾试验鱼。试验鱼初始平均体重约0.90 g左右，各组间无显著差异（P>0.05）。
1.2.2 饲养管理
试验期间投喂自制饲料，每日投喂两次（9:00、16:00），每次投喂量为每池鱼总重的0.5%~1%（投喂量据根具体情况调节）。养殖期56 d。试验水族箱规格为100 cm×60 cm×60 cm，试验期间开启循环水，24 h充氧增氧,水温（27.7±2.2） ℃，光照时间10L/14D（光照时间为8:00至18:00）,水体pH值为7.6~7.8，溶氧量>4 mg/l，氨氮浓度<0.15 mg/l，亚硝酸氮浓度<0.02 mg/l。
1.2.3 试验日粮
试验期间投喂自制饲料，基础日粮配方及营养水平见表1。日粮制成颗粒饲料，破碎，冰箱中4 ℃保存。
1.3 测定指标
1.3.1 躯体生化组成测定
养殖试验结束前，试验鱼禁食1 d。各试验组取24尾鱼（每个重复6尾），进行肌肉常规营养成分测定。试验鱼解剖，去除内脏，剪成小块条状放入组织捣碎匀浆机中搅碎制成肉糜，然后冷冻干燥24 h去除水分。干燥完全后将鱼肉放入组织破碎机搅碎成为鱼粉，置入袋中放入干燥器内待测。
水分的测定，采取冷冻干燥法，冷冻干燥24 h，CHRIST1-2冷冻干燥机；灰分的测定，采用550 ℃高温灼烧法；粗蛋白的测定，采用凯氏定氮法；粗脂肪的测定，采用索氏抽提法；磷的测定，采用钼黄比色法；钙的测定，采用EDTA测定法。
1.3.2 脏器指数的测定
试验结束时，各试验组随机取12尾鱼（每个重复3尾），进行脏器指数测定。试验鱼体重用电子天平称重(精确到0.1 g)，然后解剖，分别取出待测脏器，用0.6%的生理盐水清洗，滤纸吸干，电子分析天平称重（精确到0.001 g）。计算公式如下：
脏体比（%）=个体内脏团重量/个体重量×100
肝胰脏指数（%）=个体肝胰脏重量/个体重量×100
胆指数（%）=个体胆重量/个体重量×100
脾脏指数（%）=个体脾脏重量/个体重量×100
头肾指数（%）=个体头肾重量/个体重量×100
1.3.3 血液白细胞计数
1.3.3.1 白细胞稀释液
采用3%乙酸溶液，即取冰乙酸3 ml，加蒸馏水至100 ml,混合,亦可于上述溶液中加入龙胆紫液1～2滴,便于观察。各小试管内加入白细胞稀释液0.38 ml,备用。
1.3.3.2 采血
试验结束时，每个重复取5尾鱼进行白细胞计数。用注射器尾静脉取血。吸取20 μl血液，立即吹入加有稀释液的小试管内，反复吸洗2~3次，将血液与稀释液混合均匀。
1.3.3.3 观察计数
在光学显微镜下用低倍镜观察计数。
1.4 数据处理
统计分析在STATISTICA version6.0环境下进行，试验数据采用单因子方差分析（ANOVA），多重比较采用Duncan's法检验方法。
2 试验结果
2.1 躯体生化组成(见表2)
由表2可知，3个MCS添加组水分含量均较空白对照组有不同程度降低，但差异不显著（P＞0.05）；粗蛋白含量较空白对照组有所降低（P＞0.05）；粗脂肪含量较空白对照组有不同程度增加(P＞0.05)；0.25% MCS组灰分含量为10.95%,显著低于空白对照组(P＜0.05)，0.50% MCS组、1.00% MCS组灰分含量也不同程度低于空白对照组（P＞0.05）；各组间钙、磷含量无显著差异（P＞0.05），且变化趋势不明显。
2.2 脏器指数(见表3)
0.50% MCS组脏体比为17.59%，极显著低于空白对照组（P＜0.01）；0.25% MCS组、1.00% MCS组脏体比也不同程度地低于空白对照组，但差异不显著（P＞0.05）。3个MCS组肝胰脏指数均低于空白对照组，且0.50%组与空白对照组之间差异显著（P<0.05）。3个MCS添加组胆指数均极显著低于空白对照组（P＜0.01），1.00% MCS组胆指数也显著低于0.25% MCS组（P<0.05），且随MCS添加量的增加，胆指数呈现下降趋势(见表3)。
各试验组头肾指数从高到低依次为0.50%MCS组>空白对照组>1.00%MCS组>0.25%MCS组；脾脏指数从高到低分别为1.00%MCS组>空白对照组>0.50%MCS组>0.25%MCS组（见表3）。各组间头肾指数、脾脏指数变化趋势不明显，差异均不显著（P＞0.05）。
2.3 白细胞数目（见表4）
各试验组鲫鱼血液白细胞数目从高到低依次为0.50%MCS组>空白对照组>0.25%MCS组>1.00%MCS组，各组间血液白细胞数目差异不显著（P＞0.05），且无明显变化趋势。
3 讨论
3.1 多糖复合物对鲫鱼躯体生化组成的影响
曹丹等(2004)研究表明，壳聚糖对鲫鱼肌肉营养成分不仅无不良影响，且有一定的改善作用。杨慧等(2007)研究表明,糖萜素可改善肉鸡肌肉品质。肉仔鸡基础日粮中添加500 μg/kg糖萜素,可使肌肉脂肪含量较对照组提高20.18%。本试验中,3个多糖复合物添加组鲫鱼躯体粗脂肪含量均较空白对照组有所增加,而水分含量、灰分含量则有不同程度降低，且0.25% MCS组灰分含量显著低于空白对照组（P＜0.05）。这与Francis等(2001)研究三萜皂甙类对尼罗罗非鱼肌肉营养成分影响时的结果相一致。表明本试验中添加多糖复合物对鲫鱼躯体生化组成无不良影响，且有一定的改善作用。
3.2 多糖复合物对鲫鱼脏器指数的影响
脏器指数是评价脏器生理功能的，即用脏器重量占个体体重的百分数表示，可以较为宏观地反映脏器的生长状况。在生物医学研究中，脏器重量、脏器指数是衡量动物功能状态及发育进程的重要指标，同时也可作为动物对环境适应的近似指标。诸多的营养学问题在肝胰脏的形态学、组织学及生理机能等方面有直接或间接的反映和表现，在多数情况下肝胰脏指数小一点为好。脏器指数作为评价水产养殖动物形体、生理机能健康的指标得到广泛应用。
张昭萍等(2001)研究表明,壳聚糖可降低肝脏脂肪含量,对脂肪肝有明显治疗作用。华雪铭等(2006)报道，饲料中添加0.2%的壳聚糖，对暗纹东方鲀（Fugu obscurus）肝体比具有显著降低作用。本试验中，添加0.50%多糖复合物可极显著降低试验鲫鱼脏体比（P＜0.01），对肝胰脏指数也有显著降低作用(P<0.05)；添加0.25%、0.50%和1.00%多糖复合物，对试验鲫鱼胆指数均具有极显著降低作用（P＜0.01）。表明本试验中添加多糖复合物对水产养殖动物形体、生理机能有一定的改善作用。
3.3 多糖复合物对鲫鱼非特性免疫指标的影响
有研究报道，在日粮中添加壳聚糖、糖萜素可以增强养殖对象的免疫力。但本研究中，多糖复合物对鲫鱼血液白细胞数量、头肾指数及脾脏指数的影响均不明显（P>0.05）。其原因可能是由于：①多糖的给予方式也是影响免疫试验结果的重要因素。在研究甲壳素对隆颈巨额鲷免疫特性影响时，注射、口服和体外试验的结论并不一致。②鱼类不同免疫指标在投喂多糖类物质后，在不同时间达到峰值，而且维持峰值的时间也不尽相同。常青等（2006）研究结果表明，在饲料中添加壳聚糖，短期（30 d）可以显著提高花鲈鱼血清溶菌酶活性（P<0.05），长期则对其无影响，甚至还略低于空白对照组。胡兵等（2008）研究表明，试验早期（15、30 d）黄芪多糖对异育银鲫的非特异免疫力有明显的促进作用，但在45 d后作用效果不是很明显。
4 结论
① 本试验中添加多糖复合物对鲫鱼躯体生化组成无不良影响，且有一定的改善作用。
② 本试验中，添加0.50%多糖复合物可极显著降低试验鲫鱼脏体比（P<0.01），对肝胰脏指数也有显著降低作用（P<0.05）；添加0.25%、0.50%和1.00%多糖复合物，对试验鲫鱼胆指数均具有极显著降低作用（P<0.01）。表明本试验中添加多糖复合物对水产养殖动物形体、生理机能有一定的改善作用。
③ 本研究中，多糖复合物对鲫鱼血液白细胞数量、头肾指数及脾脏指数的影响均不明显。
参考文献
[1] 向枭,向勇,冯君,等.甲壳素和左旋咪唑对罗非鱼的实验[J].饲料研究,2002(12):4-6.
[2] 常青,梁萌青,王家林,等.壳聚糖对花鲈生长和非特异性免疫力的影响[J].海洋水产研究,2006,27(5):17-22.
[3] 詹勇,沈水昌,徐仲钧,等.糖萜素饲料添加剂研究与应用[J]. 广东饲料,2003,12(2):33-35.
[4] 肖明松,王志耕,孙玉军,等.饲料中添加果寡糖和糖帖素对中华鳖消化酶活力的影响[J].中国畜牧兽医,2004,31(2):10-13.
[5] 张艳秋,詹勇,黄磊.多糖复合物——糖萜素对淡水白鲳生长和肉质指标作用的初级报告[J].饲料工业,2005,26(4):57-59.
[6] 杨胜.饲料分析及饲料质量检测技术[M].北京:北京农业大学出版社,1994.
[7] 曹丹,周洪琪.壳聚糖对异育银鲫的生长、蛋白质合成及肌肉营养成分的影响[J].淡水渔业,2004,34(1):6-10.
[8] 杨慧.糖萜素对艾维茵肉鸡生长性能和肉质的影响[J].福建畜牧兽医,2007,29(2):6-8.
[9] 李云格.饲料添加剂糖萜素研究[J]. 饲料研究, 2004（3）:24-26.
[10] Francis G, Makkar H P S, Becker K. Effects of Quillaja saponins on growth, metabolism egg production and muscle cholesterolin dividually reared Nile tilapia[J]. Comparative Biochemistry and physiology Part C, 2001, 129: 105-114.
[11] 季晓辉,张建琼.医学免疫学与医学微生物学[M].北京:科技出版社, 2003.
[12] 叶元土.水产动物的营养与饲料研究评价指标体系[J].饲料广角,2004,20(20):19-21.
[13] Oliva Teles A, Gouveia A J, Gomes E. The effect of different processing treatments on soybean meal utilization by rainbow trout. Oncorhynchus mykiss[J]. Aquaculture, 1994, 124: 343-349.
[14] 刘立鹤,严晶,张俊杰,等.不同饲料配方及加工工艺对奥尼罗非鱼生长性能及形体指标的影响[J].饲料与畜牧,2008,20(8):25-28.
[15] 张昭萍,戚晓红,王瑞云,等.壳聚糖合并中药对脂肪肝治疗作用的实验研究[J].南京中医药大学学报（自然科学版）,2001,17(2):107-109.
[16] 华雪铭,周洪琪,张冬青,等.多糖和益生菌对暗纹东方鲀免疫功能的调节[J].水产学报,2006,30(2):230-235.
[17] 马玉敏,吴斌,李青竹.糖萜素对雏鸡免疫器官影响的研究[J].黑龙江畜牧兽医,2006(12):64-65.
[18] Esteban M A, Mulero V, Cuesta A, et al. Effects of injecting chitin particles on the innate immune response of gilthead seabream (Spares aurata L.)[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2000, 10:543-554.
[19] Cuesta A M, Esteban A, Meseguer J. In vitro effect of chitin particles on the innate cellular immune system of gilthead seabream (Sparus aurata L.)[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2003, 15:1-11.
[20] 胡兵,刘军,侯永清,等.黄芪多糖对异育银鲫非特异性免疫力的影响[J].水利渔业,2008,28(3):108-111.
（编辑：沈桂宇，）
刘军，武汉工业学院动物科学与营养工程学院，副教授，430023，湖北省武汉市汉口常青花园中环西路特1号。
陈爱敬、胡先勤、汪明、黄峰，单位及通讯地址同第一作者。
荣克明，武汉天辰生物科技有限公司。
收稿日期：2009-10-30 |
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