蓝汉冰 曹俊明 李国立 赵红霞 陈 冰 许丹丹
摘 要 以对照饲料和分别添加50、100、200、300、400 mg/kg鸟苷酸二钠盐（5′-GMP-Na2）的试验饲料，饲养平均体重为（0.61±0.01） g凡纳滨对虾42 d，试验结束时测定各组对虾的相对增重率、存活率、饲料系数和全虾的体成分组成，分析血清和肝胰脏总抗氧能力和超氧化歧化酶活性。结果显示，摄食添加50 mg/kg鸟苷酸饲料组对虾的增重率最高，其次为100 mg/kg组，但6组对虾的组间差异未达到显著水平（P>0.05）。与对照组相比，各添加组对虾的粗蛋白和粗脂肪含量略有升高，但差异不显著（P>0.05）。各组对虾血清及肝胰腺中的总抗氧化能力（T-AOC）和超氧化物歧化酶（SOD）活性差异均不显著（P>0.05），其中添加量为50和100 mg/kg时，血清T-AOC分别比对照组升高11.2%和5.8%。试验结果表明，饲料中添加一定量的鸟苷酸钠盐可在一定程度上提高凡纳滨对虾的增重率、体蛋白及脂肪的含量以及血清及肝胰腺中T-AOC水平和SOD活性。
关键词 凡纳滨对虾；鸟苷酸；生长；抗氧化
中图分类号 S945.1
5′-鸟苷酸二钠盐（5′-GMP-Na2）是一种呈味核苷酸，主要添加在部分食品中。已有的研究结果表明，呈味核苷酸GMP和IMP能有效提高鱼虾的摄食效果，是很好的诱食剂（王桂军等，2002）。Ikeda I等（1991）报道肌苷酸、鸟苷酸、尿苷酸、尿苷二磷酸、尿苷三磷酸对竹荚鱼有摄食刺激活性。苗玉涛等（2004）在苏氏芒鲶的诱食试验中也证明鸟苷酸具有明显的促摄食作用。但目前有关5′-GMP-Na2对水产动物生长性能的影响尚未见报道。因此，本试验通过在饲料中添加不同含量的5′-GMP-Na2饲养凡纳滨对虾42 d，测定与生长相关的部分指标及部分抗氧化酶的活性，研究其对凡纳滨对虾生长及部分抗氧化指标的影响，以便为鸟苷酸在水产动物中的应用提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验饲料
用鱼粉、豆粕、花生粕等为蛋白源，高筋面粉为糖源，鱼油和豆油为脂肪源配制成基础饲料（饲料配方见表1）,并作为对照饲料。在基础饲料中分别添加50、100、200、300和400 mg/kg鸟苷酸(5′-GMP-Na2,购自Sigma公司,纯度>99.0%）配制5种试验饲料。6种饲料饲喂的试验虾分别记为G0、G50、G100、G200、G300和G400组。所有饲料原料在过60目筛后混匀,经单螺杆挤压机制粒后,45 ℃干燥,-20 ℃冷藏保存待用。
1.2 试验虾及饲养管理
试验用凡纳滨对虾来自珠海斗门虾苗厂，试验开始前在广东省农科院畜牧研究所水产试验基地水泥池中暂养4周，期间投喂商品饲料。试验开始时，选择体重相近、健康活泼的虾苗初重(0.606±0.005) g，分为6组，每组4个重复，每个重复40尾虾。分别于每天的8:00、14:30、20:00投喂各组饲料，前2周按体重的8%投喂，根据摄食情况调整其后的投喂量。饲养试验持续6周。试验水源为经沙滤、消毒后的天然海水与自来水混合后的咸淡水，试验期间盐度5‰～8‰，水温25～30 ℃。养殖全过程不断充氧曝气，溶解氧（7.25±0.56） mg/l，氨氮（0.17±0.06） mg/l，亚硝酸氮（0.018±0.008） mg/l，pH值7.95±0.04。
1.3 取样与分析
饲养试验结束时，停止喂料24 h，将虾取出称重，计算每组对虾的死亡率、增重率和饲料系数。每个重复随机取15只虾，从围心腔取血,注入Ependoff离心管（1.5 ml）中。同时剥离肝胰脏，称重后置于-80 ℃低温冰箱保存备用。
1.3.1 血清和肝胰脏匀浆制备
血清制备：从凡纳滨对虾围心腔取血，注入Ependoff离心管（1.5 ml）中，在0～4 ℃冰箱放置过夜，15 000 r/min离心1 min，取上层血清于-80 ℃低温冰箱保存待测。
肝胰腺匀浆液制备：从-80 ℃低温冰箱取出肝胰腺样品，4 ℃解冻，然后取0.3 g左右剪碎的肝胰腺，放入玻璃匀浆器中，按1：9的比例加入匀浆液，在冰浴条件下用机器匀浆1 min,制成10%匀浆液,在4 ℃，3 000 r/min离心10 min，取上清液，分装后于-80 ℃低温冰箱保存待测。
1.3.2 常规营养成分分析
全虾体成分测定参照国标相关方法。水分：GB/T6435—1994;粗蛋白含量:GB/T6432—1994；粗脂肪含量:GB/T6433—1994;粗灰分含量:GB/T6438—19942。
1.3.3 生化指标分析
血清和肝胰脏的总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化歧化酶（SOD）均按南京建成试剂盒方法测定，T-AOC和SOD的测定方法为比色法。
1.4 数据统计分析
试验结果用平均数±标准误(M±SE)表示。用SPSS 11.0版软件先进行One-way avona分析，若差异显著，再进行Duncan's法多重比较，显著性水平P<0.05。
2 结果
2.1 各组凡纳滨对虾的增重率、成活率（见表2）
摄食不同剂量的核苷酸饲料后，凡纳滨对虾的生长情况如表2所示。增重率最高的是50 mg/kg添加量组，其次是100 mg/kg组，其余各组均低于对照组;成活率最高的是400 mg/kg添加量组（90.00%），最低是100 mg/kg添加量组（81.25%）。经统计学分析，5′-鸟苷酸二钠盐对凡纳滨对虾的增重率、存活率和饲料系数的影响均不显著（P>0.05）。
从表3可见，对照组和添加5′-GMP-Na2各组对虾全虾的水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量组间差异不显著（P>0.05），其中添加5′-GMP-Na2各试验组粗蛋白和粗脂肪含量均比对照组有所升高，粗蛋白含量最高值出现在100 mg/kg添加组，粗脂肪含量以300 mg/kg组最高。
2.3 各组凡纳滨对虾血清T-AOC水平及SOD活性（见表4）
由表4可见，随着饲料中5′-GMP-Na2添加量的增加，对虾血清T-AOC和SOD活性分别呈现先升高后降低的趋势，当添加量为100 mg/kg时，血清中的SOD活性均达到最高值，但与对照组差异未达到显著水平（P>0.05），当添加量超过100 mg/kg后，血清中的T-AOC水平和SOD活性均低于对照组。
2.4 各组凡纳滨对虾肝胰脏T-AOC水平和SOD活性（见表5）
由表5可见，各组凡纳滨对虾肝胰脏T-AOC水平没有显著差异（P>0.05），但除G100组外，其它添加5′-GMP-Na2各组凡纳滨对虾肝胰腺中的T-AOC水平均略高于对照组。随着饲料中5′-GMP-Na2添加量的增加，凡纳滨对虾肝胰腺中的SOD活性呈现出先升高后下降的趋势，其中G50和G100组的SOD活性均高于对照组，以G50组最高；各组肝胰腺的SOD活性均没有显著差异（P>0.05）。
3 讨论
3.1 饲料中添加鸟苷酸二钠盐对凡纳滨对虾生长性能的影响
本试验结果中，各试验组凡纳滨对虾的增重率、成活率和饲料系数均与对照组无显著差异（P>0.05），但随着5′-GMP-Na2添加量的增加，增重率具有先升高(G50、G100)后下降(G200、G300、G400)的趋势。本试验结果初步表明,5′-GMP-Na2对凡纳滨对虾的生长性能没有显著影响,究其原因,可能有以下几点,一是核苷酸对鱼类的促生长作用其中一个主要原因就是它能促进鱼类的摄食。有研究发现,单体核苷酸UMP对苏氏芒鲶有很好的诱食效果（苗玉涛等，2004），IMP对豹纹东方鲀具有良好的诱食效果（Hidaka等，1977），但本试验中没有观察到不同添加量的GMP对凡纳滨对虾有明显的诱食作用。二是核苷酸作为一种半必需营养素,一般在机体受到损伤或处于应激状态下才需外源补充核苷酸。正常情况下，机体通过自身合成也能满足正常所需。第三是有学者认为单独使用腺苷酸作为核苷酸添加剂的饲料去饲养虹鳟鱼,会降低饲料利用率、氮沉积量、体增重，使死亡率增加；而以鸟嘌呤（1.85%）、黄嘌呤（2.17%）、次黄嘌呤（1.94%）组成的复合饲料添加剂喂养的虹鳟鱼没有上述现象（Rumsey等，1992）。目前，除IMP被单独使用外，其它核苷酸类添加剂都是以复合形式添加到饵料，由于各种核苷酸在鱼体内的代谢途径和作用方式还未完全明了，所以对于如何选择各类核苷酸，以及按何种配比添加到饲料中仍有待进一步的研究。
3.2 饲料中添加鸟苷酸二钠盐对凡纳滨对虾体成分组成的影响
本试验结果表明，各试验组凡纳滨对虾的体成分组成与对照组均没有显著差异（P>0.05），但G100的蛋白含量高于对照组，这与核苷酸在凡纳滨对虾(孙圣兰，1999)和眼斑拟石首鱼（Peng Li，2007）的应用研究中所得的结果类似。核苷酸作为蛋白质激酶可使代谢酶活性增强，诱导激素（如生长激素等）或酶的合成，促进体内蛋白质的合成，从而使体重增加（咎林森等，1994）。另有报道表明，饲料中添加核酸并不能起到节约氮源，提高氮在体内的沉积，对金头鲷(Sparus aurata)的生长性能并没有起到促进作用(A.Oliva-Teles等，2006)，因此核苷酸对体成分影响的作用机理还有待进一步的研究。
3.3 饲料中添加鸟苷酸二钠盐对凡纳滨对虾血清及肝胰腺部分抗氧化指标的影响
机体的抗氧化水平，在一定程度上反映了机体的健康状况。机体在代谢过程中不可避免产生自由基。过量的自由基与不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，会损伤细胞膜及细胞内的大分子蛋白和核酸，对机体造成损伤。有资料表明，在水产动物饲料中添加外源核苷酸对机体是有益的（Carver J D，1994）。
在甲壳动物中，用T-AOC作为衡量对盐度和热应激、对氨氮应激和弧菌攻毒应激的反应指标（Chien Y H等，1991；Pan C H等，2003a；Pan C H等，2003b）,草虾(Penaeus monodon)摄入抗氧化剂能提高机体总的抗氧化能力(Jagneshwar Dandapat等，2000)。在本试验结果中,饲料中添加50和100 mg/kg 5′-GMP-Na2能在一定程度上提高血清中的T-AOC水平,以50 mg/kg添加量组最高；添加5′-GMP-Na2各组肝胰腺中的T-AOC水平均高于对照组,以50和200 mg/kg添加量组最高,但与对照组差异不明显。综合上述结果,认为饲料中添加低剂量5′-GMP-Na2能在一定程度上提高凡纳滨对虾机体中T-AOC水平,与李石营等(2006)在小鼠中的实验结果相类似。5′-GMP-Na2之所以具有提高机体内T-AOC水平,可能是因为5′-GMP-Na2能提高凡纳滨对虾体内各种抗氧化酶的活性所致。外源核苷酸能显著升高LPS刺激小鼠肝Na+-K+-ATP酶、小肠超氧化物歧化酶(SOD)活性、血清总抗氧化能力（T-AOC）（李石营等，2006）。在本试验中，5′-GMP-Na2的作用效果并不明显，可能是由于养殖环境较好，对虾几乎没有受到外界环境的刺激，体内的抗氧化系统处于较为稳定的平衡状态。
超氧化歧化酶SOD是一种存在于对虾体内的含金属离子的氧化还原酶，是抑制脂质过氧化作用的一种重要抗氧化酶。能够清除超氧化物阴离子自由基，催化超氧阴离子（O2-）歧化为H2O2和O2，从而消除自由基的损害，其清除速度比生理pH值下自我歧化要高104倍（李英哲，2001）。饲料中添加核苷酸能有效提高动物机体组织中SOD水平在部分研究中已有报道（戴秋萍等，2003；王广军等，2006；许群等，2004），本试验的结果中，饲料中添加5′-GMP-Na2对凡纳滨对虾血清及肝胰腺中的SOD活性（P>0.05）无显著影响，但低添加量（50、100 mg/kg）能在一定程度上提高对虾血清和肝胰腺中的SOD活性。
4 结论
本试验结果表明，饲料中添加鸟苷酸二钠盐对凡纳滨对虾的生长、体成分组成及部分抗氧化指标没显著影响，但低剂量添加（50和100 mg/kg）能在一定程度上提高凡纳滨对虾的增重率、体蛋白及脂肪的含量，同时能提高血清及肝胰腺中T-AOC水平和SOD活性。
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（编辑：徐世良，）
蓝汉冰，广东省农科院畜牧研究所，510640，广州市天河区五山镇大丰街1号。
曹俊明（通讯作者）、李国立、赵红霞、陈冰、许丹丹，单位及通讯地址同第一作者。
收稿日期：2009-05-18
★ 广东省农业科技攻关项目基金资助（2005B20301011） |
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