汤菊芬 吴灶和 简纪常 鲁义善 汤艳萍
罗非鱼（Tilapia），俗称非洲鲫鱼、白色三文鱼等，具有广盐性、食性杂、耐低氧、繁殖强以及肉味鲜美、肉质细嫩等特点，是联合国粮农组织向全世界推荐的养殖品种，也是我国南方重要的淡水养殖鱼类。然而随着高密度养殖和环境日益恶化，病害日趋严重，造成的损失逐年增加。在防治罗非鱼病时，滥用药物严重，导致环境污染、耐药菌株的大量产生，特别是药物残留等问题，使我国罗非鱼的品质下降，出口受阻。本试验将黄芪、当归、金银花、板兰板等10种中草药按一定比例配制成3种复方中草药制剂，以罗非鱼为研究对象，探讨中草药饲料添加剂对其生产性能和肌肉成分的影响,以期为生产绿色、无公害的安全水产品提供一定的参考依据。
1 方法与材料
1.1 复方中草药制剂及饲料配制
试验用中草药购自湛市江市麻章某药店，各种药材分别粉碎过筛后，按一定比例配制成A、B、C 3种复方中草药制剂，于-20 ℃冰箱保存备用。
分别按1.5%的比例将A、B、C 3种复方中草药制剂添加在罗非鱼商品饲料中，制成A、B、C 3种药铒饲料，风干后放入-20 ℃冰箱中保存备用。
1.2 试验用鱼及饲养管理
挑选外观正常,体质健壮,尾均体重为(16.58±0.48) ｇ的吉富罗非鱼作为试验用鱼。试验分为3个试验组和1个对照组,每个组设3个重复,每个玻璃钢桶放养吉富罗非鱼30尾,玻璃钢桶水容量为0.3 m3。试验用鱼先暂养7 d后,称初始体重,然后平均分组。试验组分别投喂A、B、C 3种药铒料,对照组投喂同品牌同批次的罗非鱼商品饲料(试验饲料营养成分见表1)。每天于09：00和17：00投喂饲料，日投饵量为鱼体重的3%～5%。每周根据鱼的生长状况，相应地调节投饲量，称终末体重量前24 h停止投喂。试验全过程不间断充气增氧，每天换水1次，换水量为2/3。水温为(28.5±1.5) ℃，养殖试验持续4周。
1.3 样品的采集和保存
试验结束时，对每个桶中的罗非鱼进行称重并计数，每组随机抽取15尾罗非鱼,将罗非鱼体表用抹布抹干，去鳞、去鳃、去内脏，去除鱼皮，取其两侧侧线上的背肌肉，5尾鱼的肌肉合为1个样品，放于无菌密封袋中，立即用液氮快速冷冻，然后转至－20 ℃的冰箱中保存，用于肌肉成分测定。
1.4 指标测定
1.4.1 生长指标的计算
增重率(%)=(终末体质量-初始体重/初始体重×100;
成活率（%）=试验结束时收鱼尾数/试验开始时放鱼尾数×100；
饵料系数(FCR)=摄食量/(终末体重一初始体重)；
蛋白质效率=(终末体重-初始体重)/(摄入饲料量×饲料蛋白质含量)。
1.4.2 肌肉成分测定
1.4.2.1 肌肉营养成分测定
粗蛋白采用凯氏定氮法，粗脂肪采用索氏抽提法，水分采用105 ℃烘干法，灰分用550 ℃马弗炉灼烧法测定。
1．4．2．2 肌苷酸测定
肌苷酸测定参考黄广明（1995）、叶春艳（1995）方法[1-2]稍加改进进行。用分析天平精确称取罗非鱼背部肌肉1.000 g,把肌肉剪碎后放入试管中,加1 ml蒸馏水,塞上瓶塞,在水浴中煮沸1 h,取出冷却后将肉汤倒出,于肉汤内加0.5 ml氯仿,充分摇匀,在3 000 r/min下离心15 min，取水相，进行滤纸层析（每个样品同时进行滤纸层析3次）。将新华号滤纸裁成长30 cm，宽10 cm，在滤纸一端5 cm处用铅笔轻轻划出点样的位置,用微量进样器吸取上述处理好的样品(水相)50 μl，直接点样于滤纸上(斑点长3 cm、宽0.4 cm),点样后用吹风机加速干燥,然后做层析。层析溶剂为异丙醇：浓氨水：水=7：2：1,室温层析至离上端约3 cm处,取出滤纸,于室内干燥,在紫外灯下观察有深紫色斑点即为核苷酸等区带。与标准样品层析的条带对照，剪下肌肉样品的肌苷酸条带,用10 ml 0.1 N HCl浸泡约20 h。用UV-2550紫外分光光度计测定各样品的光密度，与标准肌苷酸溶液进行比较计算出每克肌肉中肌苷酸的含量。
1.4.2.3 肌肉中丙二醛含量(MDA)测定
取肌肉0.5 g,用5 ml的冰冷生理盐水漂洗，除去血液,滤纸拭干,称重,放入小烧杯中。用移液管量取0.86%冷生理盐水,其体积总量应该是组织块重量的9倍,用移液管取总量2/3的生理盐水于烧杯中,用小剪刀尽快剪碎组织块。将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3的冷生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块。一起倒入匀将管中进行匀浆。浆制备好的匀浆液用普通离心机3 000 r/min离心10 min,取离心后的上清液进行测定。
按南京建成生物工程研究所试剂盒操作说明进行。
1.4.2.4 肌肉中胆固醇(cholesterol,CHO)含量测定
称取肌肉样品0.2 g,加入5 ml氯仿：甲醇=2：1,匀浆。匀浆液3 000×g离心10 min,取上清液2 ml在65 ℃水浴中用氮气吹干，残渣中加入10 ml KOH-醇溶液（12% KOH用90%乙醇新鲜配制），在80 ℃水浴中皂化15 min。皂化完毕，取出试管，加5 ml蒸馏水，冷却到室温。非皂化部分用10 ml乙烷提取，静置分层后取5 ml乙烷提取液在65 ℃水浴中用氮气吹干。
按南京建成生物工程研究所试剂盒操作说明进行。
1.5 数据统计分析
采用SPSS11.5分析软件对样本进行单因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan's法多重分析。大写字母不同表示差异极显著（P<0.01），小写字母不同表示差异显著（P<0.05）。
2 结果
2.1 复方中草药对吉富罗非鱼的生长、成活率和对饲料利用的影响（见表2）
从表2可以看出，复方中草药对吉富罗非鱼的成活率没有影响，对增重率、饵料系数及蛋白质效率等无显著影响（P>0.05）。但与对照组相比，在饲料中添加1.5%的C方中草药制剂可以使吉富罗非鱼的增重率提高10.82%，饵料系数降低4.71%，蛋白质效率提高15.68%。
从表3可看出，A、B、C 3种复方中草药均可以显著降低吉富罗非鱼肌肉中的粗脂肪含量(P<0.05),但对粗蛋白、粗灰分和水分含量无显著影响(P>0.05)。
2.3 复方中草药对吉富罗非鱼肌肉肌苷酸含量的影响（见图1）
从图1可看出,A、B、C 3种复方中草药制剂均可以显著提高吉富罗非鱼肌肉中的肌苷酸含量(P<0.05)。
2.4 复方中草药对吉富罗非鱼肌肉总胆固醇（CHO）含量的影响（见图2）
从图2可以看出,与对照组相比，B、C 2种复方中草药制剂均可以显著降低吉富罗非鱼肌肉中的总胆固醇含量（P<0.05），A方无显著影响（P>0.05）。
从图3可以看出，与对照组相比，A、B、C 3种复方中草药制剂均可以极显著降低吉富罗非鱼肌肉中的丙二醛含量（P<0.01）。
3 讨论
3.1 复方中草药对罗非鱼生长性能的影响
中草药含有多种生物活性物质和天然营养物质，能促进动物的机体代谢和蛋白质以及酶的合成，进而促进动物的生长，提高营养物质的利用率，降低饵料系数。吴文等(1998)[1]在饲料中添加0.3%绞股兰饲喂草鱼，增重率可提高31.25%。段铭等（1999）[2]在鱼饵料中添加1%由党参、黄芪等8味复方中草药添加剂，鲫鱼增长率提高21.5%。王永玲等（2002）[3]在饲料中添加1%的大蒜也能提高鲫鱼增重率7.99%，同时可降低饲料系数10.37%。陆志款等（2008）[4]将黄芪、当归、甘草和山楂等配成复方中草药,按质量分数0.5%、1.0%、1.5%和2.0%添加到基础饲料中，连续喂养红笛鲷56 d，从28 d开始，试验组红笛鲷的增重率全部显著高于对照组。本试验的结果表明，在商品饲料中添加1.5%的复方中草药制剂C可以使吉富罗非鱼的增重率比对照组提高10.82%，饲料系数降低4.71%，蛋白质效率提高15.68%。这说明C方中草药制剂作为饲料添加剂，可促进罗非鱼的生长，降低养殖成本。
3.2 复方中草药对罗非鱼肌肉品质的影响
许多学者对肉类及其制品的鲜味研究发现,对鲜味贡献最大的两类物质为氨基酸和肌苷酸。肌苷酸是体内物质代谢过程中的中间产物,在鱼肉、牛肉、鸡肉中的含量比较为丰富,是肌肉鲜味的标志[7]。用核苷酸降解产物来评价鱼肉鲜度和质量已受到广泛的重视,测定肌苷酸的积累量,已被证明可作为衡量水产品鲜度的指标[8－9]。
皂苷广泛存在于植物中，是不少中草药的主要有效成分，根据其化学结构可分为三萜皂甙和甾体皂甙。研究表明，中草药所含的三萜皂甙成分，能显著提高养殖动物肌肉中的肌苷酸含量和肌肉的抗氧化性能，降低胆固醇含量,从而有效改善养殖动物的肌肉品质。孙德文(2003)[10]在艾维茵肉鸡饲料中添加糖萜素，试验结果表明,饲料中添加500 mg/kg的糖萜素具有改善鸡肉颜色、提高肉的抗氧化性能和肌肉中肌苷酸含量、降低肌肉中胆固醇含量的功能。张艳秋等(2005)[11]报道饲料中添加125 mg/kg糖萜素,可以显著提高白鲳肌肉中的肌苷酸含量,并显著降低其胆固醇含量。张艳秋（2005）[12]用含油茶皂甙的饲料喂养罗非鱼42 d，结果表明，添加油茶皂甙对罗非鱼肌肉常规营养成分（水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分）等无显著影响，但添加60 mg/kg油茶皂甙，可显著提高罗非鱼肌肉中的肌苷酸含量，降低胆固醇含量。杨慧（2007）[13]报道，饲料中添加500 mg/kg糖萜素,艾维茵肉鸡胸肌中肌苷酸含量比抗生素组提高了13.45%、胆固醇含量比抗生素组降低了15.49%。罗庆华等（2008）[14]饲料中添加不同浓度的杜仲提取物、大蒜素以及两者的复方,能显著提高草鱼肌肉中的蛋白质含量,降低脂肪含量，改善草鱼的肌肉品质。本试验的结果表明，在商品饲料中分别添加1.5%的A、B、C 3种复方中草药制剂，对吉富罗非鱼肌肉水分、粗蛋白、灰分等虽无显著影响，但均能显著提高吉富罗非鱼肌肉中的肌苷酸含量，降低粗脂肪、胆固醇和丙二醛含量。同上述研究结果相似,说明本试验所用三种复方中草药制剂作为饲料添加剂不仅能显著增加吉富罗非鱼鲜味物质——肌苷酸的含量和肌肉的抗氧化性能，提高吉富罗非鱼的商品价值，还能有效降低罗非鱼肌肉脂质及胆固醇含量，对生产低脂、低胆固醇的安全罗非鱼水产品具有重要意义。（参考文献14篇，刊略，需者可函索）
（编辑：徐世良，）
汤菊芬，广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，高级工程师，524025，广东省湛江市霞山解放东路40号。
吴灶和（通讯作者）、简纪常、鲁义善，单位及通讯地址同第一作者。
汤艳萍，湛江粤华水产饲料有限公司。
收稿日期：2009-06-22
★ 广东省农业科技攻关项目（2007A020200006-10） |
相关信息
